Ξεκινήστε το τουρ σας στην είσοδο στο Piazzale degli Uffizi 6. Μπορείτε να περιμένετε σε ουρά για μία ή δύο ώρες. Μπορείτε επίσης να αγοράσετε προαιτημένο εισιτήριο εκ των προτέρων ώστε να μπορείτε να μπείτε σε συγκεκριμένη ώρα. Μερικά από τα δωμάτια μπορεί να είναι κλειστά όταν επισκέπτεστε, οπότε βεβαιωθείτε να ρωτήσετε ποια είναι ανοιχτά όταν μπαίνετε. Οι ώρες είναι 8:15 πμ έως 6:50 μμ, αν και το ταμειακείο κλείνει στις 6:05 μμ. Οι ώρες διευρύνονται το καλοκαίρι. Η Uffizi είναι ένα μακρύ, U-σχήματος κτίριο. Μπείτε στο γλυπτοστρωμένο foyer, πηγαίνετε στον δεύτερο όροφο, προχωρήστε στον Ανατολικό Κόριδο και προχωρήστε ευθεία στο Δωμάτιο 1, το οποίο εκθέτει αρχαία γλυπτά και αρχαιότητες. Βγείτε από αυτό το δωμάτιο, πηγαίνετε αριστερά και στο Δωμάτιο 2, τη δεύτερη πόρτα αριστερά. Εδώ εκτίθενται τρεις ζωγραφιές της Παναγίας και του Παιδιού, ζωγραφισμένες από τον Duccio di Boninsegna, τον Cimabue και τον Giotto. Πηγαίνετε αριστερά στο Δωμάτιο 3, όπου εκτίθενται σιεναϊκές ζωγραφιές 14ου αιώνα, με έργα του Simone Martini, Lippo Memmi και Pietro και Ambrogio Lorenzetti. Στρίψτε δεξιά στο Δωμάτιο 4, το οποίο εστιάζει σε φιορεντινά έργα 14ου αιώνα από τον Taddeo Gaddi, Bernardo Daddi, Giottino, Andrea Orcagna και τον Master of Saint Cecilia.
Στρίψτε δεξιά στα Δωμάτια 5 και 6, τα οποία είναι αφιερωμένα σε διεθνή γοτθικά έργα 15ου αιώνα από τον Lorenzo Monaco, τον Agnolo Gaddi και τον Gentile da Fabriano. Ειδικής Σημείωσης είναι το «Adoration of the Magi» του Fabriano και το «Coronation of the Virgin» του Monaco. Επιστρέψτε στο Δωμάτιο 2, μετά αριστερά στο Δωμάτιο 7, όπου θα δείτε το «Madonna and Child with Saint Anne and Angels» του Masolino και Masaccio και το «Battle of San Romano» του Paolo Uccello. Πηγαίνετε δεξιά στο Δωμάτιο 8, το οποίο είναι αφιερωμένο στο έργο του Filippo Lippi, του γιού του Filippino και των μαθητών τους. Αριστερά, το Δωμάτιο 9 εκθέτει τα έργα των αδερφών Antonio και Piero del Pollaiolo. Στρίψτε δεξιά στα Δωμάτια 10 έως 14, τα οποία είναι πραγματικά μόνο ένα δωμάτιο αφιερωμένο κυρίως στο έργο του Sandro Botticelli, συμπεριλαμβανομένων των διάσημων «Primavera» και «The Birth of Venus».
Προχωρήστε αριστερά στο Δωμάτιο 15, το οποίο εκθέτει έργα του Pietro Perugino, Piero di Cosimo και Luca Signorelli, καθώς και της «Annunciation» και «Adoration of the Magi» του Leonardo da Vinci. Στρίψτε αριστερά στο Δωμάτιο 16 — το πρώην χάρτης του Medici, το οποίο τώρα στεγάζει ιταλικές αναγεννησιακές ζωγραφιές και ρωμαϊκά έργα 2ου αιώνα. Επιστρέψτε στο Δωμάτιο 15, βγείτε στον Ανατολικό Κόριδο και κάντε αριστερά στο Δωμάτιο 18, την οκτάγωνη Tribune, η οποία σχεδιάστηκε να κρατήσει το απόλυτο καλύτερο από τις συλλογές των Medici. Περιλαμβάνει τώρα έργα του Raphael, Alessandro Allori, Jacopo Pontormo, Carletto Caliari, Giorgio Vasari και Andrea del Sarto, καθώς και νωρί ρωμαϊκά κομμάτια. Από την Tribune, πηγαίνετε αριστερά στο Δωμάτιο 17, ένα δωμάτιο που ήταν κάποτε αφιερωμένο στην έκθεση επιστημονικών οργάνων αλλά τώρα στεγάζει γλυπτά και χαλκά από ρωμαϊκούς χρόνους έως 19ο αιώνα. Επιστρέψτε στην Tribune και πηγαίνετε δεξιά στο Δωμάτιο 19, το οποίο εκθέτει βόρεια και κεντρικά ιταλικά έργα από τέτοιους όπως ο Luca Signorelli και ο Pietro Perugino. Το Δωμάτιο 20 διαθέτει έργα του Lucas Cranach the Elder, Albrecht Dürer και Hans Brueghel the Elder, συμπεριλαμβανομένου του «Adoration of the Magi» του Dürer και του «Adam» και «Eve» του Cranach. Το Δωμάτιο 21 εκθέτει βενετζιάνικα έργα του Giorgione και Giovanni Bellini, το Δωμάτιο 22 το έργο του Hans Holbein the Younger, Albrecht Altdorfer και Hans Memling και το Δωμάτιο 23 το έργο του Correggio και Andrea Mantegna.
Βγείτε στον Arno Corridor και στρίψτε αριστερά στο Δωμάτιο 24, μια αίθουσα γεμάτα μινιατούρες. Από εκεί, στρίψτε στον Arno Corridor, ο οποίος φυσικά έχει εξαιρετική θέα του ποταμού, μετά στρίψτε δεξιά στον Δυτικό Κόριδο και αριστερά στο Δωμάτιο 25. Αυτό το δωμάτιο περιλαμβάνει το «Tondo Doni» του Michelangelo, και άλλα φιορεντινά έργα. Πηγαίνετε αριστερά στο Δωμάτιο 26, το οποίο επισημαίνει τα νωρά έργα του Andrea del Sarto και του Raphael, συμπεριλαμβανομένου του πρώην «Madonna of the Harpies» και του δεύτερου «Madonna of the Goldfinch». Επόμενο, στο Δωμάτιο 27, είναι τα έργα τέτοιων 16ου αιώνα φιορεντίνων όπως ο Rosso Fiorentino και ο Jacopo Pontormo, ενώ το Δωμάτιο 28 εκθέτει το έργο τέτοιων βενετζιάνων όπως ο Sebastiano del Piombo και ο Titian, του οποίου το «Venus of Urbino» είναι το πιο γνωστό έργο που εκτίθεται. Το Δωμάτιο 29 εστιάζει σε 16ου αιώνα έργα από τέτοιους καλλιτέχνες όπως ο Parmigianino και ο Dosso Dossi. Πηγαίνετε αριστερά στο Δωμάτιο 30, το οποίο έχει έργα του Garofalo και Ludovico Mazzolino.
Επιστρέψτε στο Δωμάτιο 29, μετά στρίψτε δεξιά στο Δωμάτιο 31, το οποίο περιλαμβάνει έργα του Veronese, Δωμάτιο 32, με έργα του Jacopo Bassano και Tintoretto, Δωμάτιο 33, ένας κόριδος με έργα του El Greco, Bronzino, Frans Floris, Giorgio Vasari, Jacopo Zucchi, Orazio Samacchini και Alessandro Allori, και Δωμάτιο 34, με έργα του Giulio Campi, Lorenzo Lotto και Giovan Battista Moroni. Επιστρέψτε στον Δυτικό Κόριδο, στρίψτε αριστερά και ξανά αριστερά στο Δωμάτιο 35, όπου θα δείτε έργα τέτοιων Τοσκάνων όπως ο Cigoli, Passignano, Santi di Tito και Federico Barrochi. Επιστρέψτε έξω στον Δυτικό Κόριδο, στρίψτε αριστερά, περάστε την Σκάλα Buontalenti και το Δωμάτιο 41 και στρίψτε αριστερά στο Δωμάτιο 42, ένα δωμάτιο με ρωμαϊκό γλυπτό που βλάφθηκε κατά τη διάρκεια μιας αυτοκινητοβόμβας το 1993. Επιστρέψτε στον Δυτικό Κόριδο, πηγαίνετε αριστερά και αριστερά ξανά στο Δωμάτιο 43, το οποίο διαθέτει έργα του Mattia Preti, Domenichino, Guercino, Domenico Feti και Annibale Carracci, και Δωμάτιο 44, το οποίο εκθέτει τέτοιους Φλεμίζους και Ολλανδούς μάρτυρες όπως ο Rembrandt. Στρίψτε δεξιά στο Δωμάτιο 45, το οποίο περιλαμβάνει 18ου αιώνα έργα του Francisco Goya, Rosalba Carriera, Canaletto, Francesco Guardi, Jean Baptiste Siméon Chardin και Giuseppe Maria Crespi. Βγείτε στον Δυτικό Κόριδο ξανά, περάστε μια άλλη σκάλα, μετά πηγαίνετε αριστερά στο μπαρ ή ευθεία μπροστά στην τερασα καφέ, η οποία κοιτάζει πάνω στην Piazza della Signoria, το Palazzo Vecchio, τη Βρύση του Νεπτούνο και το άγαλμα του Grand Duke Cosimo I.
Τερματίστε κατεβαίνοντας μια σκάλα στον πρώτο όροφο και τον Arno Corridor με τεράστιο βάζο Medici και, στρίβοντας αριστερά, θα βρείτε μια suite δωματίων που βρίσκονται απευθείας κάτω από τον δεύτερο όροφο Ανατολικό Κόριδο. Πρώτα είναι ένα δωμάτιο αφιερωμένο στο έργο του Caravaggio, το οποίο περιλαμβάνει το «Bacchus» και «Medusa» του. Τα επόμενα δωμάτια δόθηκαν στα έργα του Bartolomeo Manfredi, Gherardo delle Notti, τους «Caravaggeschi» (ή αυτούς που έζωγράφισαν στο στυλ του Caravaggio) και τον Guido Reni.